Produktoj
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR-Detekta ilaro por 2019-nCoV
Atendita uzado
Ĉi tiu ilaro estas uzata por kvalita detekto de nova koronavirus (2019-nCoV) uzante gorĝajn swabojn, nazofaringajn swabojn, bronkoalveolaran lavan fluidaĵon, sputon. La detekta rezulto de ĉi tiu produkto estas nur por klinika referenco, kaj ĝi ne devas esti uzata kiel la sola. evidenteco por klinika diagnozo kaj traktado. Ampleksa analizo de la kondiĉo estas rekomendita en kombinaĵo kun la klinikaj manifestiĝoj de la paciento kaj aliaj laboratoriotestoj.
Inspekta principo
La ilaro baziĝas sur unupaŝa RT-PCR-teknologio.Fakte, la nova koronavirus (2019-nCoV) ORF1ab kaj N-genoj de 2019 estis elektitaj kiel la plifortigaj celregionoj.Specifaj enkondukoj kaj fluoreskaj enketoj (N-gen-enketoj estas etikeditaj per FAM kaj ORF1ab-enketoj estas etikeditaj per HEX) estas dizajnitaj por detekti novtipan koronavirusan RNA de 2019 en specimenoj.La ilaro ankaŭ inkluzivas endogenan internan kontrolan detektan sistemon (interna kontrolo-gen-enketo etikedita kun CY5) por monitori la procezon de specimena kolekto, RNA kaj PCR-plifortigo, tiel reduktante falsajn negativajn rezultojn.
Ĉefaj komponantoj
| Komponentoj | Volumo（48T/Kiro） |
| RT-PCR-reaga solvo | 96 µl |
| nCOV-enkonduko TaqMan sondamiksaĵo (ORF1ab, N-geno, RnaseP-geno) | 864 µl |
| Negativa kontrolo | 1500µl |
| nCOV Pozitiva kontrolo（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Propraj reakciiloj: RNA-ekstraktado aŭ purigaj reakciiloj.Negativa/pozitiva kontrolo: La pozitiva kontrolo estas RNA enhavanta la celfragmenton, dum la negativa kontrolo estas nuklea acida akvo.Dum uzo, ili devas partopreni en la eltiro kaj devus esti konsideritaj infektaj.Ili devas esti manipulitaj kaj forigitaj laŭ koncernaj regularoj.
La interna referenca geno estas la homa RnaseP geno.
Kondiĉoj de konservado kaj limdato
-20±5℃, evitu ripetan frostigadon kaj degelon pli ol 5 fojojn, valida por 6 monatoj.
Aplika instrumento
Kun FAM / HEX / CY5 kaj alia plurkanala fluoreska PCR-instrumento.
Specimenpostuloj
1.Aplikeblaj specimenaj tipoj: gorĝaj lavaĵoj, nazofaringaj lavaĵoj, bronkoalveolara lavlikvaĵo, sputo.
2.Specimenkolekto (asepsa tekniko)
Faringa swab: Viŝu la tonsilojn kaj malantaŭan faringan muron per du swabaĵoj samtempe, tiam mergu la swabkapon en provtubo enhavanta la specimenan solvon.
Sputo: Post kiam la paciento havas profundan tuson, kolektu la tusitan sputon en ŝraŭbĉapo provtubo enhavanta la specimenan solvon;bronkoalveolara lava fluido: Specimeno de medicinaj profesiuloj.3.Storage kaj transportado de specimenoj
Specimenoj por virusizolado kaj RNA-testado devas esti provitaj kiel eble plej baldaŭ.Specimenoj kiuj povas esti detektitaj ene de 24 horoj povas esti stokitaj je 4℃;tiuj kiuj ne povas esti detektitaj ene de 24
horoj devas esti stokitaj je -70 ℃ aŭ malsupre (se ne ekzistas konserva kondiĉo de -70 ℃, ili devus esti
provizore stokita ĉe -20 ℃ fridujo).Specimenoj devus eviti ripetan frostiĝon kaj degelon dum transportado.Specimenoj devas esti senditaj al la laboratorio kiel eble plej baldaŭ post kolekto.Se specimenoj devas esti transportitaj sur longaj distancoj, seka glacia stokado estas rekomendita.
Testo-Metodoj
1 Specimena pretigo kaj RNA-ekstraktado (specimena pretiga areo)
Oni rekomendas preni 200μl da likva specimeno por RNA-eltiro.Por rilataj eltiraj paŝoj, raportu al la instrukcioj de komercaj RNA-ekstraktaj ilaroj.Kaj la negativa kaj negativa
kontroloj en ĉi tiu ilaro estis implikitaj en la eltiro.
2 PCR-reakciilo-preparo (reakciila prepara areo)
2.1 Forigu ĉiujn komponantojn el la ilaro kaj degelu kaj miksu ĉe ĉambra temperaturo.Centrifugu je 8,000 rpm dum kelkaj sekundoj antaŭ uzo;kalkulu la postulatan kvanton da reakciiloj, kaj la reagsistemo estas preta kiel montrite en la sekva tabelo:
| Komponentoj | N porcio (25µl sistemo) |
| nCOV-enkonduko TaqMan-sonda miksaĵo | 18 µl × N |
| RT-PCR-reaga solvo | 2 µl × N |
| *N = nombro da specimenoj testitaj + 1 (negativa kontrolo) + 1 (nCOVpozitiva kontrolo) | |
2.2 Post plene miksado de la komponantoj, centrifugu por mallonga tempo por lasi la tutan likvaĵon sur la tubo muro fali al la fundo de la tubo, kaj tiam alikvoti la 20 µl plifortigan sistemon en la PCR-tubon.
3 Specimenado (specimenprepara areo)
Aldonu 5μl de la negativaj kaj pozitivaj kontroloj post eltiro.La RNA de la provaĵo estas aldonita al la PCR-reagtubo.
Ferme kovru la tubon kaj centrifuĝu je 8,000 rpm dum kelkaj sekundoj antaŭ ol transdoni ĝin al la plifortiga detekta areo.
4 PCR-plifortigo (plifortigita detekta areo)
4.1 Metu la reaktubon en la specimenan ĉelon de la instrumento, kaj agordu la parametrojn jene:
| scenejo | Ciklo nombro | Temperaturo(°C) | Tempo | kolektoretejo |
| Reversetransskribo | 1 | 42 | 10 min | - |
| Antaŭ-malnaturacion | 1 | 95 | 1 min | - |
| Ciklo | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30-aj jaroj | kolekto de datumoj |
Elekto de kanalo de detekto de instrumentoj: Elektu la kanalon FAM、HEX、CY5 por la fluoreskeca signalo.Por referenco fluoreska NENIU, bonvolu ne elekti ROX.
5 Analizo de rezultoj (Bonvolu raporti al la eksperimentaj instrukcioj de ĉiu instrumento por agordo)
Post la reago, konservu la rezultojn.Post analizo, ĝustigu la komencan valoron, finvaloron kaj sojlan valoron de la bazlinio laŭ la bildo (la uzanto povas ĝustigi laŭ la reala situacio, la komenca valoro povas esti agordita al 3~15, la finvaloro povas esti agordita al 5~20, alĝustigo) en la logaritma grafeo Ĉe la sojlo de la fenestro, la sojla linio estas en la logaritma fazo, kaj la plifortiga kurbo de la negativa kontrolo estas rekto aŭ sub la sojla linio).
6 Kvata kontrolo (Procedura kontrolo estas inkluzivita en la testo) Negativa kontrolo: Neniu evidenta plifortiga kurbo por FAM, HEX, CY5-detektokanalojn
COV pozitiva kontrolo: evidenta plifortiga kurbo de FAM kaj HEX-detektaj kanaloj, Ct-valoro≤32, sed neniu plifortiga kurbo de CY5-kanalo;
La supraj postuloj devas esti plenumitaj samtempe en la sama eksperimento;alie, la eksperimento estas nevalida kaj devas esti ripetita.
7 Determino de rezultoj.
7.1 Se ne ekzistas plifortiga kurbo aŭ Ct-valoro> 40 en la FAM kaj HEX-kanaloj de la prova specimeno, kaj ekzistas plifortiga kurbo en la CY5-kanalo, oni povas juĝi, ke ne ekzistas 2019 nova koronavirus (2019-nCoV) RNA en la specimeno;
.2 Se la prova specimeno havas evidentajn plifortigajn kurbojn en la FAM kaj HEX-kanaloj, kaj la Ct-valoro estas ≤40, oni povas juĝi, ke la specimeno estas pozitiva por la nova koronavirus de 2019 (2019-nCoV).
7.3 Se la prova specimeno havas klaran plifortigan kurbon nur en unu kanalo de FAM aŭ HEX, kaj la Ct-valoro estas ≤40, kaj ne ekzistas plifortiga kurbo en la alia kanalo, la rezultoj devas esti retestitaj.Se la retestrezultoj estas konsekvencaj, la specimeno povas esti taksita kiel pozitiva por la nova
koronavirus 2019 (2019-nCoV).Se la retestrezulto estas negativa, oni povas juĝi, ke la specimeno estas negativa por la nova koronavirus de 2019 (2019-nCoV).
Pozitiva juĝa valoro
La ROC-kurba metodo estas uzata por determini la referencan CT-valoron de la ilaro kaj la interna kontrola referenca valoro estas 40.
Interpreto de testrezultoj
1.Ĉiu eksperimento devas esti provita por negativaj kaj pozitivaj kontroloj.Testrezultoj povas esti determinitaj nur kiam kontroloj plenumas kvalitkontrolajn postulojn
2.Kiam la FAM kaj HEX-detektaj kanaloj estas pozitivaj, la rezulto de la CY5-kanalo (interna kontrola kanalo) povas esti negativa pro sistema konkuro.
3.Kiam la interna kontrolo-rezulto estas negativa, se la detektaj kanaloj FAM kaj HEX de la provtubo ankaŭ estas negativaj, tio signifas, ke la sistemo estas malŝaltita aŭ la operacio estas malĝusta, la testo estas malvalida.Tial, la specimenoj devas esti retestitaj.
